Tehnologer писал(а):Прошу помощи. Решается вопрос приёма на работу.
Человек выбил деньги на изобретение экспрес-метода для анализа на наличие в организме некоторых вирусов.
Был выделен и запатентован некий специфический фермнт, присутствующие в СЛЮНЕ только при некотором вирусном заболевании. Запатентованна, также, аминокислотная последовательность (я ее не знаю), разрезаемая этим специфическим ферментом в строго определенном месте.
Вопрос: как можно быстро определить разрезал фермент мешень или нет?
Подробностей я из этого чела вытянуть не смог, но как я понял, тест нужно поставить на поток. Т.е. на границе или в аэропорту лабораторию никто ставить не будет.
Приходят в голову только качественные реакции. Но какие могут быть реакции на олигопептиды? Понятно, что их нет. В сущности, необходимо просто установить факт ферментативного гидролиза.
Очень прошу посоветуйте, пожалуйста, хоть что-нибуть близкое!
Опыта у меня нет - закончил год назад, книг мало. Язык за год выучил, английский есть, на работу не могу уже полгода устроится по специальности.
Буду благодарен за любой совет - на вас одна надежда!!!
---Решается вопрос приёма на работу.
Человек выбил деньги на изобретение экспрес-метода для анализа на наличие в организме некоторых вирусов.
О приеме этого человека на работу и идет речь?
Очень странно, что человек, разработавший и нашедший нужную АК-последовательность не знает, как подобрать аналитический реагент на пептидазу. Сам специально этим не занимался, но на эту тему должно имется куча патентов.
Вобщем идея там такая. Фермент гидролизует пептидную связь если смотреть шире, то амидную связь. Субстрат изобретается следующим образом в пептиде есть аминокислоты определяющие специфичность и "пептидная" связь которая подвергается гидролизу эту связь заменяют на амидную при чем либо с N конца петида либо с C-конца. На N-привешивается карбоксил(ну например ацетил или остаток пара аминобензойной кислоты) при гидролезе вываливается кислота вот ее-то и определяют уксус, например по изменению рН, ПАБК каким нибудь азосочетанием с образованием диазокрасителя. На карбоксильном конце можно организовать амид с аналогичными свойствами(аммиак, параминофенол) последний при гидролизе меняет поглощение на какой-то длине ультрафиолетовой волны, ну азосочетание тоже можно устроить.
--Если как объект брать слюну - то там этих ферментов - вагон и маленькая тележка, кроме того есть и олигопептиды.
Сомнения Искандера очень правильные. Субстрат нужно изобрести такой чтобы никакими другими протеазами(пептидазами) он не гидролизовался.
---Насчёт суперспецифичности фермента - сомневаюсь. Вряд-ли есть такой фермент, который щепит ТОЛЬКО 1 белок (полипептид) Обычно есть ещё побочные пептиды, которые тоже щепятся.
И более того один и тот же пептид может гидролизоваться разными пептидазами.
Специфичность протеаз вещь весьма условная и зависит не только от АК-последовательности, но и от условий реакции и третичной структуры полипептида.
Если говорить об ИФА и вирусах, то вирусы можно и ПЦР поискать. А ифа лучше делать не на вирусный антиген(фермент), а на наличие антител к тому или иному вирусному антигену.
Правда и ИФА и ПЦР требуют времени порядка часа, двух на анализ, зато это можно сделать сразу на 50-200 проб, так что средняя скорость будет сравнима с прямым ферментным анализом пептидазы.
