Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

вопросы современной биологической химии, молекулярной биологии, химической энзимологии и смежных наук
biochem, molbio, chemical enzymology and related discussions for professionals
Ответить
Demiurg
Сообщения: 774
Зарегистрирован: Вт мар 09, 2010 3:33 pm

Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение Demiurg » Сб апр 25, 2020 12:44 pm

Здравствуйте уважаемые участники форума!

Хотелось бы узнать Ваше мнение по следующему вопросу:

я делал липидные экстракты из сыворотки крови крыс по методу Фолча (образцы сывороток смешивались со смесью хлороформ:метанол (2:1), потом эти смеси центрифугировались (для расслоения), нижний слой (хлороформный) концентрировался в вакууме, полученный липидный экстракт растворялся в 100% метаноле). Затем измерялась флуоресценция фракции липидов в метаноле (возбуждение - 360 нм, эмиссия - 430 нм). Вообще делал это с целью определить т.н. Шиффовы основания липидов (продукты взаимодействия всяких альдегидов, образующихся при окислительной деструкции ненасыщенных жирных кислот, с аминогруппами сфинголипидов). Это, насколько могу судить, получилось.


Но заинтересовал другой вопрос: а что там, в этой липидной фракции, флуоресцирует на 500 нм (при возбуждении на 360 нм)?

На графике самый нижний спектр (А1) - это "чистый" 100% метанол.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
bigM
Сообщения: 4949
Зарегистрирован: Ср фев 15, 2017 2:05 am

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение bigM » Вс апр 26, 2020 3:32 pm

жёлчные пигменты?
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение avor » Пн апр 27, 2020 8:34 am

bigM писал(а):
Вс апр 26, 2020 3:32 pm
жёлчные пигменты?
В крови? У крыс печень отвалилась?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение avor » Пн апр 27, 2020 8:46 am

Самое простое объяснение - это спектр одного того же соединения. Можно разделить экстракт на ТСХ, экстрагировать пятна и посмотреть спектры флуоресценции разных пятен.

Аватара пользователя
bigM
Сообщения: 4949
Зарегистрирован: Ср фев 15, 2017 2:05 am

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение bigM » Пн апр 27, 2020 9:12 am

avor писал(а):
Пн апр 27, 2020 8:34 am
bigM писал(а):
Вс апр 26, 2020 3:32 pm
жёлчные пигменты?
В крови? У крыс печень отвалилась?
нет, конечно :lol: желчные пигменты (билирубин, биливердин, уробилин, стеркобилин и их дериваты) и внеэритроцитарный гемоглобин нормальные компоненты плазмы.
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение avor » Пн апр 27, 2020 9:48 am

Судя по этому спектру возбуждения
Изображение

Вызвать флуоресценцию билирубина возбуждением на 360нм весьма затруднительно.
разве что предположить, что это FRET

Аватара пользователя
bigM
Сообщения: 4949
Зарегистрирован: Ср фев 15, 2017 2:05 am

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение bigM » Пн апр 27, 2020 9:53 am

ну во-первых это гипотеза, а во-вторых про билирубин речи нет. охота поискать, ищите по bile pigments
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.

Demiurg
Сообщения: 774
Зарегистрирован: Вт мар 09, 2010 3:33 pm

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение Demiurg » Чт апр 30, 2020 9:37 am

жёлчные пигменты?
Самое простое объяснение - это спектр одного того же соединения. Можно разделить экстракт на ТСХ, экстрагировать пятна и посмотреть спектры флуоресценции разных пятен.
Интересные соображения, спасибо!

Это не критика, а мои собственные предположения:

в плазме/сыворотке крови билирубин почти полностью связан с альбумином, поэтому вряд-ли он мог в сколь-нибудь значимых количествах перейти в липидную фракцию. Ну, может быть, не связанный перешёл и флуоресцирует. Хотя, опять же, свободный (не связанный с альбумином) билирубин имеет очень слабую флуоресценцию.
Спектры флуоресценции всяких порфиринов имеют два характерных пика флуоресценции (600-650 нм и второй в ещё более длинноволновой области)...
С печенью у этих крыс было всё порядке (это были обычные, не экспериментальные животные).

Аватара пользователя
bigM
Сообщения: 4949
Зарегистрирован: Ср фев 15, 2017 2:05 am

Re: Липидная фракция сыворотки крови (флуоресценция)

Сообщение bigM » Чт апр 30, 2020 10:38 am

уперлось вам в билирубин, других пигментов масса и их дериватов
уробилин.png
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.

Ответить

Вернуться в «биохимия и молекулярная биология / biochemistry and molecular biology»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 13 гостей