Наверно образуется гидратная шуба и поэтому втягивает. Хотя задавался вопросом почему именно он этим свойством обладает, а не метанол или этанол, напримерavor писал(а): ↑Вс авг 18, 2019 8:09 pmИз вашего протокола не ясно, к какому объему добавляют 25мкл ацетата. По идее этот объем 250 мкл. Но при ттаком раскладе скорее всего такая смесь расслоится на водный и органический слой. Водного правда будет очень мало микролитров 50-100. Так что не очень понятно что имели ввиду авторы протокола. Воще РНК как и ДНК любят вываливать этанолом, ну иногда изо пропанолом(его надо брать в меньших количествах по отношению к водному раствору НК), про бутанол слышу первый раз. Бутанолом иногда концентрируют водные растворы . Так как при смешении с ним образуется органическая фаза, которая втягивает в себя часть воды из раствора.
Высаживает лучше.(обычно добавляют 0,6-0,7V водного раствора)Скажите пожалуйста, почему изопропанола меньше добавляют?
В принципе подойдет, но в ней много лишнего(например, бутанол и эфир - они нужны только если вы хотите концентрировать НК и ее у вас отчаянно мало. Но сейчас в таких случаях используют соосадитель например ПААГ(линейный) или гликоген, если конечно они не мешают дальнейшим манипуляциям.Не знаю на 100% ли подойдёт эта схема?....
Спасибо, будем знать. Они эффективнее в плане выхода днк?avor писал(а): ↑Вс авг 18, 2019 10:18 pmВысаживает лучше.(обычно добавляют 0,6-0,7V водного раствора)Скажите пожалуйста, почему изопропанола меньше добавляют?В принципе подойдет, но в ней много лишнего(например, бутанол и эфир - они нужны только если вы хотите концентрировать НК и ее у вас отчаянно мало. Но сейчас в таких случаях используют соосадитель например ПААГ(линейный) или гликоген, если конечно они не мешают дальнейшим манипуляциям.Не знаю на 100% ли подойдёт эта схема?....
Спасибо!avor писал(а): ↑Пн авг 19, 2019 8:22 am--То есть , если много днк можно бухать этанола без концентрирования?
Ну много/мало все относительно. Где то мг/л высаживается просто спиртом. Главное не забывать соль какую-нибудь добавлять. Меньше тоже высаживается, но хуже.
--Прочёл , что с изопропанолом можно не морозить днк, а сразу центрифугировать. Интересно
Со спиртом тоже можно не морозить(Но я морожу. Тут два процесса конкурируют: растворимость, которая падает с низкой температурой и скорость коагуляции, которая тоже падает с падением температуры), а вот сразу центрифугировать не стоит, осадок должен созреть, поэтому даже на комнате раствор надо выдержать 30' хотя бы.
--Если на 2’ останется защитная группа, например, ацетильная, как это повлияет на дальнейшее поведение рнк, например на перевод в днк обратной транскрипцией?
Думаю ревертаза ее просто не узнает. ДНКаза и РНКаза различают одну гидрокси группу, а тут ацетат целый.
Не проще ли синтезировать 80b фрагмент ДНК, чем мучаться с ревертированием РНК.
Мне будут нужны пикограммы)StYV писал(а): ↑Пн авг 19, 2019 3:17 pmВольному воля, только вот без ВЭЖХ блуждание в потемках.
Посмотрите импортные работы.
А это все стоит немалых денег.
Просто ВЭЖХ занимался с 79 года и не один десяток лет. Могу сорбент сделать колонку упаковать и много еще чего.
Было в группе 7 жидкостных хроматографов во времена Союза, они все умерли - электроника долго не живет.
Вот так и живем.
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 15 гостей
