Электрофорез. Зачем буфер?

Trevor · Сообщение **Trevor** » Чт сен 29, 2005 11:50 am

Пожалуйста, помогите!!!
Не могу точно понять

, зачем при электрофорезе помещать
гель с исследуемым веществом в буфер, почему бы просто не в воде "запустить" поле?
и каким должен быть ph буфера?
Заранее спасибо.

avor · Сообщение **avor** » Чт сен 29, 2005 2:14 pm

Trevor писал(а):Пожалуйста, помогите!!!
Не могу точно понять , зачем при электрофорезе помещать
гель с исследуемым веществом в буфер, почему бы просто не в воде "запустить" поле?
и каким должен быть ph буфера?
Заранее спасибо.

1)При электрофорезе катод защелачивается, а анод закисляется - получите абсолютно неконтролируемую ситему.
2)Чистая вода слабо проводит ток. Понадобятся высокие напряжения и следовательно дорогой источник питания, Высокая напряженность поля может подпортить молекулы.
3)Заряд молекулы может зависить от рН и даже менятся на противоположный, поэтому контролируя рН мы можем контролировать разделение.

Dimpler · Сообщение **Dimpler** » Чт сен 29, 2005 6:42 pm

Если речь идет о классическом гель-электрофорезе белков, то сама пластинка делится на две зоны - одна концентрирующая (собирает белки в одну линию), другая - разделяющая (делит белки в зависимости от их молекулярной массы). рН одной зоны 6.8, другой - 8.8. рН буфера навскидку не скажу, но знаю, что он среди его компонентов трис и глицин. Посмотрю рН завтра и скажу.
Хорошая книжка по теме - Остерманн, хроматография белков и нуклеиновых кислот. Посмотрите, она может даже тут в библиотеке есть. Там все подробно написано.

Goodfellow · Сообщение **Goodfellow** » Чт сен 29, 2005 7:00 pm

Остерманн, Хроматография белков и нуклеиновых кислот

avor · Сообщение **avor** » Пт сен 30, 2005 11:42 am

Dimpler писал(а):Если речь идет о классическом гель-электрофорезе белков, то сама пластинка делится на две зоны - одна концентрирующая (собирает белки в одну линию), другая - разделяющая (делит белки в зависимости от их молекулярной массы). рН одной зоны 6.8, другой - 8.8. рН буфера навскидку не скажу, но знаю, что он среди его компонентов трис и глицин. Посмотрю рН завтра и скажу.
Хорошая книжка по теме - Остерманн, хроматография белков и нуклеиновых кислот. Посмотрите, она может даже тут в библиотеке есть. Там все подробно написано.

Да, ладна, пацаны, нас по-моему разводят.
рН буфера, о котором вы говорите, 8.4(хотя любят написать и 8.3), но это абсолютно не важно. Там главное соотношение компонентов соблюсти. А книжка Остермана нужна не та. А та, которая про электрофорез и ултрацентрифугирование. А вооще, не понятна че собственна нада автору темы.

Enzyme · Сообщение **Enzyme** » Пт сен 30, 2005 8:36 pm

Какие книжки, какие библиотеки, господи, в каком веке Вы живете...
http://www.molbiol.ru/protocol/17_01.html
Уже год как вестерны по этому протоколу делаю, все идеально.

рН буфера, о котором вы говорите, 8.4(хотя любят написать и 8.3), но это абсолютно не важно. Там главное соотношение компонентов соблюсти

Предлагаю поменять pH концентрирующего и разделяющего геля местами. О результатах доложите. Ту же рекомендацию - автору темы (сделать все на воде). Вы же ученый - вот и поэкпериментируйте. Иногда, кстати, полезно. Так, экспериментальным образом установлено, что агарозный гель вполне можно готовить на воде, а не на форезном буфере (как положено)

Trevor · Сообщение **Trevor** » Пт сен 30, 2005 11:04 pm

Уважаемые господа и пацаны, огромное спасибо!
Век не забуду...
собственно, первый ответ удовлетворил меня вполне, остальные расширили кругозор.
Буду теперь знать, что отвечать...
За линки на Остермна тоже ориготе =)))

Кстати, насчет агарозы (с учетом того, что впервые электрофорез делала неделю назад)...добавляли в водный раствор и 2 мл буфера/ 100мл раствора....и потом возник вопрос, а зачем собственно помещать всю систему в буфер (исследовали ДНК)

простите за дилетанство...

Enzyme · Сообщение **Enzyme** » Сб окт 01, 2005 5:27 pm

Кстати, насчет агарозы (с учетом того, что впервые электрофорез делала неделю назад)...добавляли в водный раствор и 2 мл буфера/ 100мл раствора....и потом возник вопрос, а зачем собственно помещать всю систему в буфер

А какие еще предложения будут? Воткнуть электроды прям в гель?

Trevor · Сообщение **Trevor** » Сб окт 01, 2005 10:57 pm

Enzyme писал(а): А какие еще предложения будут? Воткнуть электроды прям в гель?

хе-хе-хе-хе...ну, нет, конечно....это прямо уж извращенство было бы с моей стороны так думать...
вообще...про воду думали...

Dimpler · Сообщение **Dimpler** » Пн окт 03, 2005 12:28 pm

avor писал(а):А книжка Остермана нужна не та. А та, которая про электрофорез и ултрацентрифугирование.

стопудово. Ошибочка вышла

avor · Сообщение **avor** » Пн окт 03, 2005 1:03 pm

Trevor писал(а):Уважаемые господа и пацаны, огромное спасибо!
Век не забуду...
собственно, первый ответ удовлетворил меня вполне, остальные расширили кругозор.
Буду теперь знать, что отвечать...
За линки на Остермна тоже ориготе =)))

Кстати, насчет агарозы (с учетом того, что впервые электрофорез делала неделю назад)...добавляли в водный раствор и 2 мл буфера/ 100мл раствора....и потом возник вопрос, а зачем собственно помещать всю систему в буфер (исследовали ДНК)

простите за дилетанство...

Для ДНК пункт 3 из моей изъяснялки не так важен, как первые два.

Форум химиков

Электрофорез. Зачем буфер?

Электрофорез. Зачем буфер?

Re: Электрофорез. Зачем буфер?

Кто сейчас на конференции